(胶体金法)生产工艺规程模板--乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）生产工艺规程 

1.  适用范围

适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。

2.  职责

研发部：制定本规程。

生产管理部：执行本规程

质量管理部：按本规程执行，监督本规程的执行情况。

3.  内容

3.1.依据

《乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）》产品标准

3.2.产品名称、剂型、规格

3.2.1名称：

(1) 商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）

（2）英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen(Colloidal Gold Immunochromatagraphic Assay)

（3）汉语拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance  Shiji（jiaotijin  Fa）

3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂。

3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）

3.3.产品概述

乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。阴性样本则仅在质控线（C）显色。

3.4.试剂盒组成、储存、有效期

3.4.1.试剂盒组成：

3.4.2储存条件：2-30℃保存。

3.4.3.有效期：24个月。

3.5.生产工艺流程图文件末（23页）。

3.6.生产工艺过程及工艺条件

3.6.1配液

根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进行配制。

（1）     

（2）     

（3）     

3.6.2样品稀释液分装

按照《液体分装作业指导书》，根据相应规格的装量要求进行分装，分装量＝ 规格 + 附加量。如下表所示（单位：ml/瓶）：

3.6.3 胶体金制备

（1）    量取   ml超纯水到适当大小的烧瓶中；

（2）    量取    ml烧金溶液A并加入烧瓶中；

（3）    水沸腾后，加入已经平衡的烧金溶液B    ml；

（4）    水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器，并将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。

（5）    胶体金的储存：2～8℃；有效期6个月。

3.6.4胶体金标记

3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中加入0.2MK₂CO₃液，混匀后，快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记)，混合均匀后，反应30分钟。

3.6.4.2 终止：充分反应后在搅拌中加入金标记过程终止液（20ul/1ml金溶液）；继续搅拌30分钟直至混匀。

3.6.4.3将胶联溶液离心，9000转离心6分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10；

3.6.4.4储存： 2～8℃，有效期6个月。

3.6.5  铺金液配制

3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中（即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3）

3.6.5.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中；

3.6.6 小样试验：在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤（6mm×310mm）上，用配好的质控线液、检测线液划膜一张，与其他组分组合在一起，进行检测，要求：

阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20。

灵敏度：灵敏度参考血清，呈阳性反应。

精密性：连续重复测定精密性参考品10次，反应结果应均为阳性，且显色度均一。

3.6.7 铺金

3.6.7.1按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积

3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀。

3.6.7.3 30%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。

3.6.7.4储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。

3.6.7膜包被

按照《划膜机标准操作规程》，以“252”泵速（对应速度2.7ul/cm），将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，质控线划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处，质控线与检测线相距5mm±1mm。

3.6.7.2  30%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。

3.6.7.3储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。

3.6.8 样品垫的准备

3.6.8.1按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积

3.6.8.2按计算好的体积在每张玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀。

3.6.8.3 30%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。

3.6.8.4储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。

3.6.9半成品检测：以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检，质量管理部QC按照《半成品检验作业指导书》检验合格方可进入下一道工序。

3.6.10 组装

3.6.10.1 按照《贴膜组装工序作业指导书》的规定，将包被好的NC膜贴在塑料大卡上。 3.6.10.2各组成部分的切割：各组分用切割机切割成以下大小：

金标垫：6mm × 310mm    样品垫：15mm ×310mm     吸水垫：20mm×310mm

不干胶纸：13mm× 310mm

3.6.10.3 层压

将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条，各膜层叠关系如下：

1）   不干胶纸

2）   样品垫

3）金结合物垫     

4）包被有检测线（T线）和质控线（C线）的硝酸纤维素膜

5）吸水垫

6）塑料衬片

3.6.10.4 层压参数

金标垫2片，第一片搭上NC膜2mm， 第二片搭第一片3mm ；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。   

3.6.11切条

（1）组装环境条件的控制在相对湿度30%以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。

（2）按照《切条工序作业指导书》使用切条机，将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm±0.1mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。

3.6.12检测卡的装配

按照不同规格的要求，需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中，再用压卡机进行压卡，装条时应注意检查条有无划痕污渍，宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁，平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。

3.6.13内包装

3.6.13.1  成品规格为25支/盒、50支/盒的，所对应半成品的内包装：

（1）装卡：单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。

（2）密封。密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进行封口。

3.6.13.2  成品规格为100支/盒的，所对应半成品的内包装

装筒，将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中，放入干燥剂，然后封筒。

3.6.14 外包装

（1）不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：以试纸条组装日期为“生产日期”，并由此推算出“有效期至”，批号按照《批号管理规程》的规定设置。按照《批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程》进行操作打印标签、包装盒上的“三期”。

（2）贴签：在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。

（3）成品组装：

纸盒内组份：

按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签（合格证）封口。

（4）储存：2～30℃，有效期24个月。

3.6.15.成品检定：抽检量为3%，最小抽检量为500人份。经质量管理部QC检测合格，QA做生产记录审核后开具《成品放行审核单》方可入库。

3.7 质量标准

3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：

（1）重组乙肝抗原

（2）兔IgG抗体

（3）羊抗兔IgG

（4）兔抗RBC

（6）    硝酸纤维素膜：Millipore  Hiflow  Plus  18002硝酸纤维素膜

（7）    玻璃纤维纸

3.7.2半成品质量标准：

（1）胶体金

（2）胶金垫

（3）包被膜

（4）样品稀释液

3.7.3成品质量标准：

3.8.质量控制

3.8.1.主要质量控制点：

按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点，如下表所示：

3.8.2.监控频次

每个质量控制点均应在该工序生产操作开始前、操作过程中、操作结束后进行三次监控，对于用时较长工序需适当增加监控频次。

3.8.3.监控方法

(1) 生产前，检查人员、设备、物料、环境是否符合工艺标准，并达到相应卫生要求，检查结束后决定是否准许开始生产。

(2) 检查物料名称、级别、数量、外观、状态标识、存放条件是否符合工艺要求和生产规模，原辅料、包装材料及半成品的质量是否符合要求。

(3) 检查设备、仪器、器具是否有状态标识，处于清洁、完好状态。

(4) 各相关的记录、凭证是否齐全，生产过程中的记录是否完整、规范。

(5) 检查生产工艺规程和岗位标准操作规程的执行情况，生产现场是否有序、规范。

(6) 在质量控制点工序的操作过程中实行双人核对，QA对生产全过程进行监督。

3.8.4.重点工序的监控

(1) 定量配料、定额包装是保证产品质量的关键工序，对物料质量、投料量是否符合要求实施重点监控。

(2) 生产环境（洁净度、温度、湿度、压差）是否达标是保证生产的标准化和合格率的基本条件，实施重点监控。

(3) 所有半成品生产完毕后分别取样进行质量检测，对半成品质量是否符合质量标准实施重点监控。

(4) 对包装过程中的批号和有效期打印、包装数量、包装材料使用实施重点监控。

3.9.主要生产设备一览表

3.10.技术经济指标的计算

3.10.1.最低生产量：

根据产品特点和生产能力确定本产品的最低生产量1万条

3.10.2.物料消耗定额标准：

根据1万条/批的最低生产量制定物料消耗定额标准，并以该标准作为批生产物料需求统计、经济技术指标和物料平衡计算的依据。

(1)主要原辅料的消耗定额标准：

根据各种试剂批制备量的确定方法，计算主要原辅料的消耗定额标准（如下表所示）。

3.10.2.包装材料的消耗定额（按1万人份量核算）：

3.11.物料平衡检查和收率计算

3.11.1.定义：

(1)物料平衡：指产品或物料的实际产量（或用量）与理论产量（或用量）之间的百分比，可适当考虑可允许的偏差范围。

 (2)收率：指半成品、成品的实际产量（或合格品产量）与理论产量（或投料量）之间的百分比，可适当考虑可允许的偏差范围。

(3)理论产量：指按照所用的原料、辅料、包装材料量，在生产中无任何损失或差错

的情况下产出的最大数量。

 (4)实际产量：指生产过程中的实际产出量，包括产出的合格品量、检验品量。

3.11.2.物料平衡和收率计算方法：

(1)物料平衡 ＝ 实际产量（用量）／理论产量（用量）× 100%

(2)收率 = 合格品产量 / 理论产量 × 100%（可考虑适当偏差范围）。

3.11.3.关键工序的收率范围：

3.12.工艺卫生

按以下卫生管理规程和相关标准操作规程执行：

3.13.生产安全和劳动保护

    按以下管理规程执行：

3.14.劳动组织与生产岗位定员

按《组织机构管理规程》、《员工培训管理规程》、《人员健康管理规程》执行。

3.15.环境保护

按《厂区环境卫生管理规程》、《“三废”管理规程》执行。

4.  附件

4.1.STP-08-3-001-R01-01《批生产记录》

4.2.STP-08-3-001-R02-01《批分装记录》

4.3.STP-08-3-001-R03-01《批包装记录》

4.4. 《胶体金工艺流程图》

各膜层叠关系如下：

3）   不干胶纸

4）   样品垫

3）金结合物垫     

4）包被有检测线（T线）和质控线（C线）的硝酸纤维素膜

5）吸水垫

6）塑料衬片

3.4.1.某金标试剂盒组成：